STUDY OF THE IXODES PINCERS IN THE VILLAGE OF ROZHDESTVENO

Full Text

Исследование клещей рода Ixodes, явля- причине проникновения вируса в половые ющихся переносчиками и хранителями забо- железы, в дальнейшем, зараженным клещом леваний трансмиссивной природы, характе- продуцируются уже инфицированные особи. ризующихся природной очаговостью, - наи- Передача вируса окончательному хозяину важнейшая проблема, не только вирусологии, происходит при укусе клещом, когда осу- но и экологии. В нашей стране производятся ществляется контакт зараженной слюны па- многочисленные исследования по изучению разитической особи и здоровой крови хозя- и анализу видового состава популяций иксо- ина [2; 3]. довых клещей, их биологических, экологиче- Работниками научной сферы разрабо- ских и этологических особенностей. Изуче- таны эффективные меры по предотвращению ние данного вопроса становится еще значи- распространения энцефалита. Значительное мее при учете того факта, что клещевой ви- количество времени было потрачено на два русный энцефалит - острое инфекционное главных направления защиты от клещевых вирусное заболевание, по которому Самар- инфекций, первое - истребительное, подразу- ская область занимает одно из первых мест по мевающее полное уничтожение клещей ака- заболеваемости данным вирусом [1]. рицидными производными, и профилактиче- ское, подразумевающее иммунологическую Материалы и методы защиту населения. К главным задачам по- Как известно, подавляющее число пред- следнего направления можно отнести недопу- ставителей семейства иксодовых переносят стимость перехода вируса к человеку и разра- опасные для жизни человека и животных ин- ботку способов предотвращения круговорота фекции. При этом, по данным, накопленным возбудителей в природе. Обработка акарици- многими исследователями, вирус клещу пере- дами основных прокормителей клещей - мле- дается так: первоначально, вирус переносится копитающих и птиц осуществляется специ- через поступающую кровь в желудок клеще- фическими организациями [4]. вой особи, далее происходит заражение всех Методика иммуноферментного выяв- внутренних органов, концентрирование ви- ления антигена вируса клещевого энцефа- руса в слюнных и половых железах. По лита. Метод определения антигена основан © Житяева И. Э., 2019. Житяева Ирина Эдуардовна (irzhit63@yandex.ru), магистрант биологического факультета Самарского университета 443086, Россия, г. Самара, Московское шоссе, 34. 66 Биология на твёрдофазном иммуноферментном ана- пропорциональном их объёму, но не менее лизе (ИФА). Во время первой инкубации 40 мкл. происходит связывание антигена ВКЭ (ви- 5. Тщательно перемешать содержимое рус клещевого энцефалита), содержащегося пробирки на шейкере (5-10 сек) до получения в исследуемых образцах, с иммобилизован- однородной суспензии. ными на поверхности лунок планшета мо- 6. Суспензию центрифугировать в тече- ноклональными антителами и образование ние 5 мин. Полученные супернатанты ис- комплекса «антиген-антитело». Образовав- пользовать для анализа [3-5]. шийся комплекс выявляется с помощью Проведение иммуноферментного ана- конъюгата моноклональных антител к ВКЭ лиза. Внести в две лунки, например, А-1 и с пероксидазой хрена, который добавляется В-1, по 100 мкл отрицательного контрольного одновременно с исследуемыми образцами. образца и в одну лунку, например, С-1, Во время второй инкубации с раствором 100 мкл положительного контрольного об- тетраметилбензидина происходит окраши- разца. В остальные лунки внести по 100 мкл вание раствора в лунках, содержащих ком- используемых образцов (время внесения об- плексы, антиген-антитело. Степень окраски разцов не должно превышать 10 мин. при ис- пропорциональна концентрации антигена пользовании всех лунок). ВКЭ в анализируемых образцах. После из- Во все лунки внести по 50 мкл конъ- мерения оптической плотности (ОП) рас- югата. Отрезать пленку требуемого размера. твора в лунках на основании рассчитанного Стрипы закрыть, плотно прижав пленкой. Ин- значения ОПкрит анализируемые образцы кубировать 3 ч. при температуре (25±1) °С в оцениваются, как положительные или отри- термошейкере с интенсивностью перемеши- цательные [5]. вания 400 об/мин или 18-29 ч. при темпера- Подготовка исследуемых образцов. туре (25±1) °С во влажной камере. Для проведения анализа следует ис- Внести во все лунки по 100 мкл рас- пользовать целые экземпляры клещей, так твора ТМБ и инкубировать в темноте в тече- как результаты анализа фрагментов могут ние 25 мин. при комнатной температуре. За- быть недостоверными. тем внести во все лунки по 100 мкл стоп-реа- 1. Клеща обмыть 70 % раствором эти- гента. лового спирта и высушить фильтровальной Значение ОПср К¯ не должно превы- бумагой. Поместить в пробирку типа «Эппен- шать 0,2. Значение оптической плотности в дорф» и плотно закрыть. лунках с положительным контрольным об- 2. Пробирку с клещем поместить в ем- разцом должно быть не менее 0,8. На основа- кость с жидким азотом и заморозить в тече- нии полученных данных вычислить критиче- ние 20 мин. ОП по формуле: ОПкрит = ское значение 3. Замороженного клеща осторожно и ОПср К¯ + 0,2. Результат анализа считают по- тщательно растереть в гомогенизаторе или в ложительным, если ОПобр ≥ ОПкрит, где пробирке стеклянной или металлической па- ОПобр - оптическая плотность в лунке с ис- лочкой. Для каждого образца клеща следует следуемым образцов [5]. использовать отдельный пестик во избежание контаминации. При многократном использо- Результаты и их обсуждение вании палочек их следует выдержать в тече- Исследования иксодовых клещей про- нии 30 мин в 70 % растворе этилового спирта, водились в 2015 и 2016 гг., рассмотрим сна- затем промыть дистиллированной водой и чала данные за 2015 год. высушить. Сбор объекта исследования проводился 4. В пробирку с растертым клещем, не 7 раз, один раз в каждый месяц в период май - вынимая пестик, добавить 220 мкл раствора август. Данный период обусловлен тем, что для разведения образцов (РРО). Аккуратно по данным исследователей иксодовых кле- ополоснув пестик в содержимом пробирки, щей, встречаемость как заражённых, так и не вынуть его и поместить в дезинфицирующий заражённых особей была выше. раствор. Для напитавшихся клещей больших На основе результатов был составлен размеров РРО вносить в количестве график (см. рис. 1). Вестник молодых учёных и специалистов Самарского университета. 2019. № 1 (14) 67 20 18 18 15 15 16 Количество клещей, экз. 14 12 12 12 10 8 7 7 8 5 5 6 3 4 2 1 2 0 0 27.05 7.06 25.06 6.07 28.07 3.08 25.08 Дни Опушка Тропа Рис. 1. Сезонная динамика численности клещей в разных биотопах за 2015 г. 16 14 14 14 12 11 10 Количество клещей, экз. 10 8 6 5 4 4 4 3 2 2 2 2 1 0 0 0 27 мая 7 июня 25 июня 6 июля 28 июля 3 августа 25 августа Дни Таежный Собачий Рис. 2. Видовой состав иксодовых клещей на опушке за 2015 г. 10 9 9 8 7 6 Количество клещей, экз. 6 5 5 5 4 4 4 3 3 2 2 2 1 1 0 0 0 0 0 27 мая 7 июня 25 июня 6 июля 28 июля 3 августа 25 августа Дни Таежный Собачий Рис. 3. Видовой состав иксодовых клещей на тропе за 2015 г. 68 Биология Позднее в лабораторных условиях мы На основе полученных результатов был провели определение видового состава со- составлен график (см. рис. 4). бранных клещей. Было выяснено, что в пре- После каждого сбора клещи, обнару- делах исследуемого района (с. Рождественно) женные на опушке и вдоль тропы были поме- обитает 2 вида иксодовых клещей: собачий - щены в 2 стеклянные баночки, в которых I. ricinus и таёжный - и I. рersulcatus. находились смоченные ватные диски (т.к. это При изучении полученных образцов, на влаголюбивые паукообразные) и в течение основе полученных данных был составлен часа были доставлены в лабораторию для график (см. рис. 2 и рис. 3). определения видового состава с помощью би- Исследования иксодовых клещей в 2016 нокуляра. году. Сбор объекта исследования проводился При изучении полученных образцов, на на основе опыта отбора образцов иксодовых основе полученных данных были составлены клещей в предыдущие годы. графики (см. рис. 5 и 6). 14 12 12 Количество клещей, экз. 10 10 9 8 8 6 6 6 5 4 2 2 1 1 1 0 0 0 0 30.05 6.06 27.06 4.07 29.07 5.08 26.08 Дни Тропа Опушка Рис. 4. Сезонная динамика численности клещей в разных биотопах за 2016 г. 12 10 10 9 Количество клещей, экз. 8 8 6 6 4 2 2 2 1 1 0 0 0 0 0 0 0 30 мая 6 июня 27 июня 4 июля 29 июля 5 августа 26 августа Дни Таежный Собачий Рис. 5. Видовой состав иксодовых клещей в 2016 году на опушке Вестник молодых учёных и специалистов Самарского университета. 2019. № 1 (14) 69 7 6 6 5 Количество клещей, экз. 4 4 4 3 2 2 2 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 30 мая 6 июня 27 июня 4 июля 29 июля 5 августа 26 августа Дата Таежный Собачий Рис. 6. Видовой состав иксодовых клещей в 2016 году на тропе 3 Количество клещей, экз. 2 2 1 1 0 0 0 0 0 0 30.05 6.06 27.06 4.07 29.07 5.08 26.08 Дни Рис. 7. Число заражённых клещей на опушке в 2016 году Как выяснилось при анализе данных, связи с этим мы можем утверждать, что численность клещей коррелирует с погод- встречаемость клещей зависит не только от ными условиями и сезонностью. природных условий, но и от цикла развития. Встречаемость клещей в биотопе на Все собранные особи в 2016 году были опушке леса более частая, т. к. иксодовые проверены на зараженность вирусом энцефа- клещи достаточно влаголюбивы и избегают лита с помощью иммуно-ферментного ана- прямых солнечных лучей, а здесь вблизи рас- лиза. Данный вирус был обнаружен у клещей положен водоем, куда, возможно, на водопой собранных 30 мая, 5 августа и 26 августа. 30 приходят домашние животные. На тропе, мая: на тропе -1 таёжный клещ , на идущей через лиственный лес, присутствует опушке - 1 собачий клещ. 5 августа: на повышенная освещенность солнечными лу- тропе - 1 таёжный клещ, на опушке - 2 та- чами и влажность воздуха более низкая, а ёжных клеща. 26 августа: на тропе - 3 таёж- также почва более уплотнена. ных клеща. На основе данных был составлен Два пика активности иксодовых клещей график (см. рис. 7 и рис. 8). наблюдались в конце мая и начале августа. В 70 Биология 3 3 Количество клещей, экз. 2 1 1 1 0 0 0 0 0 30.05 6.06 27.06 4.07 29.07 5.08 26.08 Дни Рис. 8. Число заражённых клещей на тропе в 2016 году Заключение Заражённость из числа собранных образцов На территории села Рождествено выяв- составляет 13 %. лено обитание двух видов иксодовых клещей: собачий (Ixodes ricinus) и таёжный (Ixodes Литература persulcatus). Встречаемость таёжного клеща в 1. Валицкая А. В. Биологические осо- 2015 и 2016 году составляет 82 %, а собачь- бенности клеща Ixodes persulcatus P. Sch., его - 18 %. способствующие активизации природных В 2015 году наибольшая численность очагов клещевого энцефалита в Тюменской иксодовых клещей зарегистрирована в травя- области: автореф. дис…. канд. биол. наук. нистом биотопе на опушке леса (среднее зна- Тюмень, 2003. 13 с. чение - 10 экз./150 м), а в лиственном лесу - 2. Вильегас З. А. Экологические осо- 6 экз./150 м. бенности и паразитиформные клещи мелких В 2016 г. наибольшая численность иксо- млекопитающих (насекомоядных и грызунов) довых клещей зарегистрирована в травяни- белорусского Полесья: автореф. дис…. канд. стом биотопе на опушке леса (среднее значе- биол. наук. Минск, 1998. 22 с. ние - 6 экз./150 м), а в лиственном лесу - 3. Томилова Т. Инфекции, передавае- 3 экз./150 м. Максимальная активность кле- мые иксодовыми клещами // Российская охот- щей в данном районе отмечена в конце мая и ничья газета. № 33. 1999. С. 21-27. начале августа, т.е. наблюдается два пика чис- 4. Михайленко А. Г. Мелкие млекопи- ленности. тающие и иксодовые клещи в природных оча- В 2015 году количество клещей было гах туляремии и некоторых зоонозов Мол- больше (113 шт), чем в 2016 году (61), это довы: автореф. дис…. канд. биол. наук. Ки- связано с тем, что в 2014 году зима насту- шинев, 1993. 17 с. пила быстро (резко) и у клещей не было вре- 5. Алешковская Е. С. Клинико-лабора- мени для подготовки к зиме, и также это торная характеристика иксодового клещевого связано с тем, что зима в 2014-2015 году боррелиоза и энцефалита в Центральном ре- была более холодная, чем в 2015-2016. гионе России. М.: Наука, 2009. 251 с. Вестник молодых учёных и специалистов Самарского университета. 2019. № 1 (14) 71

About the authors

Irina Eduardovna Zhityaeva

Samara University

Email: irzhit63@yandex.ru
Russia, Samara

References

Supplementary files