ОСОБЕННОСТИ СТАНОВЛЕНИЯ ЭСТРАЛЬНОГО ЦИКЛА КРЫС В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ГИПОТИРЕОЗА

Аннотация

В хроническом эксперименте изучали влияние гипотиреоза, развивающегося в препубертатном периоде на становление половых циклов, и начало полового созревания. Установлено, что гипотиреоз влияет на гормональную функцию яичников и оказывает антиэстрогенное действие. На становление гипоталамо-гипофизарно-гонадальной оси гипотиреоз влияние не оказывает.

Полный текст

Актуальность темы.

Исследование полового цикла самок крыс и влияния гипотиреоза на его процесс, несмотря на имеющийся внушительный список научных и учебных источников, остается актуальным в настоящее время. Существует несколько причин для исследования стадий эстрального цикла в условиях экспериментального гипотиреоза: проведение фармакологических и токсикологических исследований на самках лабораторных грызунов; выбор оптимального времени скрещивания при создании трансгенных животных или искусственном оплодотворении, поддержания колоний лабораторных животных, особенно линий с низкой фертильностью [1]. Морфологические исследования требуют определения стадии эстрального цикла и влияния на него заболеваний, в данном случае гипотиреоза. Учет данного фактора может оптимизировать выполнение «профильных» экспериментов и повысить результативность воспроизводства лабораторных животных [2].

Целью настоящего исследования являлось изучение особенности становления эстрального цикла крыс в условиях экспериментального гипотиреоза препаратом «мерказолил».

1. Материалы и методы исследования

Эксперименты проводились на 10 беспородных самках крыс, массой 73–146,5 граммов. Животные содержались в стандартных условиях вивария. Крысы находились в клетке для мелких грызунов.

Приготовление и анализ мазков для определения фаз эстрального цикла выполняли по стандартной методике [6]. Мазки брали тонкой ватной палочкой, смоченной физиологическим раствором, помещали на предметное стекло, окрашивали раствором азур-эозин по Романовскому и рассматривали с помощью светового микроскопа «БИОЛАМ» при 120-кратном увеличении.

Структура мазков исследовалась на протяжении четырёх дней в дневное время до принятия мерказолила (действующее вещество — тиамазол) и после двух недельного принятия мерказолила в дозе 5 мг на 10 крыс каждые 2 дня в растворённом виде в воде в течение шести дней с перерывом в 5 дней. Мерказолил блокирует связывание йода с тирозином в тиреоглобулине. Через ГЭП (межклеточные контакты, обеспечивающие прямой перенос ионов и небольших молекул между соседними клетками) мерказолил не проникает [2]. Статистический анализ результатов проводили в программе SigmaPlot 12.5. Рассчитывали средние значения показателей, стандартное отклонение. Сравнение выборок осуществляли методом Стьюдета.

2. Основные результаты

На влагалищных мазках мы отчетливо наблюдали следующие фазы цикла: диэструс (лейкоциты и слизь), проэструс (появление эпителиальных клеток с ядрами), эструс — происходит кариопикноз (появление чешуй) и метаэструс (лейкоциты, чешуи, клетки с ядрами) [3].

Рис. 1 Диэструс

Рис. 2 Проэструс

Рис. 3 Эструс

Рис. 4 Метаэструс

На начало эксперимента большинство животных находились в препубертатном периоде, поскольку мы не наблюдали циклических изменений в мазках, соответствующих фазам эстрального цикла. По мере увеличения массы тела животных, отмечали и появление циклических изменений в мазках, что свидетельствует о наступившем половом созревании.

Рис. 5 Зависимость наступления полового созревания от массы крысы

В ходе эксперимента было замечено, что медиана массы наступления половой зрелости у половины самок крыс составляет 70.5 г, а средняя масса, при которой наступает половое созревание — 88.7±23.9 граммов. Различий в массе наступления полового созревания у крыс, не подвергавшихся воздействию антитиреоидного препарата и интактных животных не обнаружено. Развитию полового созревания поспособствовала тактильная стимуляция влагалищного отверстия ватной палочкой, смоченной физиологическим раствором, этому доказывало, то, что в начале эксперимента влагалище было закрыто, а после длительного взятия влагалищных мазков генитальное отверстие увеличилось в размере.

Продолжительность полового цикла составила до воздействия мерказолила в среднем 5,2±1,0 суток. После двухнедельного введения антитиреоидного (тормозит синтез тироксина) препарата мерказолила медиана продолжительности полового цикла сдвинулась и составила 6 суток, а стадия эструса проходила за несколько часов и была отчётливо замечена только на второй неделе. Различия между продолжительностью полового цикла до и после введения мерказолила были значимы (p <0,05).

Рис. 6 Продолжительность эстрального цикла крыс до и на фоне приёма мерказолила

Таким образом, гипофункция щитовидной железы в препубертатном периоде практически не влияет на сроки наступления полового созревания, но оказывает влияние на продолжительность полового цикла у пубертатных животных [5]. Клеточность мазков не изменилась, данный факт может свидетельствовать о том, что гипотиреоз влияет прежде всего на гормональную функцию яичников и оказывает антиэстрогенное действие, но не на становление гипоталамо-гипофизарно-гонадальной оси [7].

Выводы

1. Гормоны щитовидной железы в пубертатном периоде участвуют в становлении полового цикла. Гипотиреоз приводит к удлинению полового цикла. Стадия эструса проходила за несколько часов и была замечена только на второй неделе эксперимента.
2. Гипотиреоз на сроки полового созревания не оказал влияния, но повлиял на формирование полового цикла.